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抗體怎么樣保存?抗體保存三大知識(shí)點(diǎn)!

發(fā)布時(shí)間:2022-05-03 16:56:06來源:艾博抗

抗體保存三大知識(shí)點(diǎn)

 

只要抗體保存好,實(shí)驗(yàn)失敗就會(huì)少

作為嬌氣的蛋白質(zhì),抗體的保存有很多需要注意的地方。小艾為大家總結(jié)了抗體保存的溫度、濃度和抗菌操作,希望對(duì)大家有幫助哦。

一向自詡玉面小生的小艾這兩天臉也是黑的不行。沒想到大風(fēng)大浪都過來的人了,陰溝里翻了船。做了這么多年的實(shí)驗(yàn),小艾竟然在一個(gè)WB實(shí)驗(yàn)上卡了一周。

更可氣的是,最后發(fā)現(xiàn)原因竟然是抗體失效了。原來是之前的實(shí)習(xí)生錯(cuò)將應(yīng)該存放于-20℃的抗體放在了4℃冰箱里,并保存了數(shù)月,于是,抗體很不幸的失效了。

看來,是時(shí)候強(qiáng)調(diào)一下抗體保存的重要性了。

抗體作為蛋白質(zhì)試劑,保存條件是非常重要的。只要條件得當(dāng),抗體一般都可以保存幾個(gè)月到幾年。

 

保存溫度

對(duì)于我們的大部分抗體而言,分裝為小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的長期保存條件。此外,在收到抗體后,也可暫時(shí)保存至4℃冰箱中,短期保存時(shí)間為1-2周。也有一小部分抗體適合長期保存于4℃冰箱。

分裝前應(yīng)先離心沉降掛在管壁和管蓋上的抗體,分裝量取決于您的實(shí)驗(yàn)常用量,但建議不能少于10μl,以避免蒸發(fā)等帶來的干擾。分裝后的抗體試劑應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,可短時(shí)間(1-2周)保存于4℃冰箱中。

反復(fù)凍融可能使抗體變性,導(dǎo)致抗體形成聚集體,從而降低其結(jié)合能力。對(duì)大部分抗體而言,在-20 ℃下保存就已足夠;在-80 ℃下保存并無明顯優(yōu)勢(shì)。保存抗體要避免使用無霜冰箱,因?yàn)閮鋈谘h(huán)(用于減少霜的形成)會(huì)造成抗體反復(fù)凍融而失活。

部分抗體試劑中會(huì)加入終濃度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液狀態(tài),從而降低凍融損傷。此類抗體產(chǎn)品請(qǐng)勿儲(chǔ)存于-80℃冰箱中,否則仍會(huì)凝固。值得注意的是,抗體在加入甘油后容易被細(xì)菌污染,操作時(shí)應(yīng)小心,確保無菌。

以下是一些需要注意的常見特例:

  • 部分酶偶聯(lián)抗體,需要保存在 4 ℃,這些抗體經(jīng)歷凍融不僅會(huì)影響抗體的結(jié)合能力,還會(huì)降低酶活性。
  • 偶聯(lián)抗體(無論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素)應(yīng)盡量保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會(huì)影響偶聯(lián)物的活性。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白,因此在實(shí)驗(yàn)各階段都應(yīng)避光。
  • IgG3 同型抗體的獨(dú)特之處在于其解凍后容易形成聚集體,因此應(yīng)始終保存在 4 ℃。
  • 腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到后應(yīng)盡快凍存。

 

防止降解

抗體試劑稀釋至工作濃度后,建議及時(shí)使用,不建議對(duì)稀釋后的抗體進(jìn)行長時(shí)間保存。如果必須保存,建議保存于4℃并于一周以內(nèi)使用。一般而言,蛋白質(zhì)濃度高于1mg/ml時(shí)更不容易降解,因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來防止降解。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。

需要注意的是,請(qǐng)勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)穩(wěn)定劑會(huì)與抗體競爭,降低偶聯(lián)效率。

 

防止污染

為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉作為抗菌劑加入抗體工作液中,保持最終濃度為 0.02% (w/v)。Abcam的多款抗體中都含有疊氮化鈉,濃度范圍為 0.02%-0.05%。抗體數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對(duì)此有說明。

此外,如果要對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或進(jìn)行體內(nèi)研究時(shí),請(qǐng)務(wù)必使用不含疊氮化鈉的試劑。抗菌劑會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),對(duì)大部分生物體都有毒害作用。

高濃度的疊氮化鈉會(huì)干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除?;蚩蛇x用0.01%硫柳汞鈉(硫柳汞),這種抗菌劑不含伯胺。

抗體溶液中的疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微透析裝置可去除疊氮化鈉。

透析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。

 

說了這么多,你記住了嗎?可別在抗體保存上摔跟頭啦!

 


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