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科普 | 帶你走進(jìn)牛血清白蛋白(BSA)的世界

發(fā)布時(shí)間:2022-11-10 22:27:47來源:儀器信息網(wǎng)

BSA(牛血清白蛋白)又稱第五組分(需要注意的是,第五組分并不是BSA的一種組份,而是Edwin J. Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術(shù)得到5種組份,其中第五種就是白蛋白),英文名稱為Bovine Serum Albumin,簡稱BSA。


1.如何選擇合適的BSA
由于牛血清白蛋白(BSA)具有多種產(chǎn)品樣式,可滿足不同種的應(yīng)用。目前網(wǎng)上的信息大多模棱兩可,市場上有低脂肪酸級、低內(nèi)毒素級、微生物級、試劑級、診斷分析級等多種BSA,因此如何選擇合適的BSA產(chǎn)品是很重要的前提。

1.微生物級別
用于細(xì)胞培養(yǎng)、動物疫苗生產(chǎn)、傳染致病菌培養(yǎng)基添加劑。

2.低內(nèi)毒素級別
用于普通細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng),作為干細(xì)胞培養(yǎng)的添加劑,作為無血清培養(yǎng)基載體以及作為營養(yǎng)添加劑。

3.低IgG級別
用于制備單克隆抗體,Southern和Northern印跡雜交實(shí)驗(yàn),可作為EIA和RIA以及常規(guī)免疫實(shí)驗(yàn)的封閉液。利用親和層析方法去除免疫球蛋白,確保在下游實(shí)驗(yàn)中不會與抗體結(jié)合。在免疫分析實(shí)驗(yàn)中不會被檢測到。每個(gè)批次的牛血清白蛋白的IgG含量不高于0.05 mg/g。

4.低脂肪酸級別
用于體外胚胎移植,也可作為胚胎移植的飼養(yǎng)層營養(yǎng)物以及表面活性添加劑。可用于常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)及組織培養(yǎng)。作為干細(xì)胞培養(yǎng)的添加劑,作為無血清培養(yǎng)基載體以及作為營養(yǎng)添加劑。利用親和層析法去除脂肪酸以及其他小分子。每個(gè)批次的牛血清白蛋白的脂肪酸含量不高于0.05 mg/g。

5.標(biāo)準(zhǔn)級別
對蛋白酶敏感的免疫分析實(shí)驗(yàn),如:RIA,EIA,熒光,化學(xué)發(fā)光分析;蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,稀釋液;蛋白,結(jié)合物和酶穩(wěn)定劑;核酸雜交實(shí)驗(yàn);細(xì)胞培養(yǎng)。

除了多種產(chǎn)品類型外,BSA的生產(chǎn)工藝更是被劃分為3種:Cohn分餾法、熱休克法和色譜層析法。


 

6.BSA的應(yīng)用

牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如:

1、在PCR體系中有助于Taq酶的穩(wěn)定性及活性,可以提高PCR的效率。

2、ELISA中也常常用到,比如封閉液,樣本稀釋液,酶結(jié)合物稀釋液都可以用BSA。

3、生化研究,遺傳工程和藥物研究。

4、血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。

5、在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。

除了以上提及的BSA應(yīng)用方向外,當(dāng)然還有其他實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用到,不妨來看看~
 

 應(yīng)用1:瘧原蟲培養(yǎng)

體外連續(xù)培養(yǎng)的瘧原蟲是研究瘧原蟲的重要工具,然而用于維持瘧原蟲生長所必需的新鮮人血清卻很難獲得。研究人員發(fā)現(xiàn),在惡性瘧原蟲培養(yǎng)基中加入含脂豐富的牛血清白蛋白可有效替代人血清,適用于紅細(xì)胞內(nèi)期瘧原蟲的體外連續(xù)培養(yǎng)[1]。或?qū)⑷搜迮c含脂豐富的牛血清白蛋白按一定比例混合加入瘧原蟲培養(yǎng)基中,瘧原蟲可達(dá)到與全人血清培養(yǎng)相似的生長狀態(tài),這樣就減少了對新鮮人血清的完全依賴[2]。

結(jié)論:與其它品牌的高脂牛血清白蛋白相比,MP Biomedicals色譜層析法的牛血清白蛋白(除低脂肪酸級以外)的總脂含量大約是它們的總脂含量的2.5倍,因此廣泛應(yīng)用于瘧原蟲的體外培養(yǎng)[3]。高脂含量的牛血清白蛋白不僅有利于細(xì)胞培養(yǎng),對于研究人員,也可減少膽固醇濃縮物或其它添加劑的使用,能顯著增加細(xì)胞滴度。

 

 應(yīng)用2:肝癌的研究

高濃度的游離脂肪酸(Free fatty Acids,F(xiàn)FAs)和腫瘤壞死因子(TNF-α)會改變細(xì)胞活動過程,引起脂毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)累積會降低游離飽和脂肪酸的脂毒性。因此,為了開發(fā)出有效治療復(fù)雜及多種影響因素引起的疾病的治療方法,尋找能調(diào)節(jié)多個(gè)細(xì)胞過程的基因,研究人員建立了一個(gè)模型,將人肝癌細(xì)胞(HepG2)置于高濃度FFA和TNF-α的生理環(huán)境中。整個(gè)實(shí)驗(yàn)分為對照組,BSA組,棕櫚酸酯組,油酸酯組及亞油酸酯組,然后檢測加入不同F(xiàn)FA的細(xì)胞中的甘油三酯(TG)累積,毒性和基因應(yīng)答情況[4]。

結(jié)論:研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)一些參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)累積及細(xì)胞毒性的基因,這些參與多個(gè)細(xì)胞過程調(diào)控的基因有望成為對抗復(fù)雜疾病的理想候選作用靶點(diǎn)。

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