為什么融合后細(xì)胞不長(zhǎng)或者融合后克隆很少?

　　可以從這幾個(gè)方面考慮：

　　1.免疫用動(dòng)物品系不正確或者品系不純。免疫用動(dòng)物一般應(yīng)該與骨髓瘤來(lái)源動(dòng)物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤細(xì)胞時(shí)應(yīng)該選用Balb/C 小鼠，同時(shí)必須使用品系純正的小鼠。

　　2.培養(yǎng)基中加入過(guò)高濃度的HAT，或者僅A 的濃度過(guò)高或HT 的濃度過(guò)低，建議用純的骨髓瘤和已有的雜交瘤作HAT 濃度篩選。

　　3.培養(yǎng)基不正確或血清濃度不正確或使用了劣質(zhì)血清。

　　4.未正確制備飼養(yǎng)層細(xì)胞。

　　5.接種雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)板過(guò)多。一般在5-20塊96孔板為宜。

　　6.融合后，未及時(shí)轉(zhuǎn)移或稀釋細(xì)胞。有人在做融合后喜歡把融合的細(xì)胞先放在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，然后再滴到96孔板上。如果在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，也可能出現(xiàn)克隆率少的情況。

　　7.細(xì)胞被污染。在顯微鏡下仔細(xì)觀察是否有明顯的微生物污染。即使看不到有明顯的微生物，也應(yīng)該考慮是否有支原體污染，條件允許的可以做支原體檢測(cè)。

　　8.細(xì)胞培養(yǎng)條件不正確，確保細(xì)胞培養(yǎng)在恒定的37度恒溫恒濕的環(huán)境，同時(shí)保證CO2濃度在4-5%左右。