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呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條研制

發(fā)布時間:2021-08-04 10:11:05來源:知網(wǎng)

  硝基呋喃類藥物是一類人工合成的抗生素,因價格低廉,被廣泛用于水產(chǎn)品的病害防治。硝基呋喃類藥物半衰期很短,在動物體內(nèi)代謝迅速,且其代謝物可在機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定存在。硝基呋喃類藥物的殘留嚴(yán)重威脅到人體的健康,因此,世界各國均把硝基呋喃類藥物列為禁用漁藥。

  目前,用于檢測硝基呋喃類代謝物的常用方法為LC-MS/MS,但這種方法需要昂貴的儀器,且前處理復(fù)雜,成本高、分析時間又長,不利于現(xiàn)場分析。而免疫層析分析法具有省時、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn),而且檢測結(jié)果重現(xiàn)性好,非常適用于現(xiàn)場檢測和大批量篩查。本研究旨在研制出呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條,初步建立呋喃唑酮代謝物殘留的免疫層析快速檢測方法,為商用化試紙條的開發(fā)提供方法依據(jù)。 首先實(shí)驗(yàn)對制備膠體金的方法進(jìn)行了優(yōu)化,采用三種還原方法來制備膠體金,對比制備的膠體金性能參數(shù),選擇最優(yōu)的還原方法。實(shí)驗(yàn)選擇檸檬酸三鈉還原制備膠體金,制備的膠體金粒徑為18nm左右。 利用上述方法制備的膠體金來標(biāo)記AOZ單克隆抗體,制備金標(biāo)探針,再將AOZ人工合成抗原(CPAOZ-BSA)和羊抗鼠二抗(IgG)分別包被在硝酸纖維素膜的T線和C線處,組裝成膠體金免疫層析試紙條。單抗的最佳標(biāo)記量為7.8μg/mL,單抗標(biāo)記最佳的pH為9.0,抗原的最佳包被濃度為1.0mg/mL,二抗的最佳包被濃度為1.0mg/mL,金標(biāo)抗體的最佳稀釋倍數(shù)為2倍稀釋,膠體金免疫層析試紙條的目測檢測限為80ng/mL。 試驗(yàn)研究了幾種硝基呋喃類代謝物(AOZ)的結(jié)構(gòu)類似物對試紙條的特異性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:試紙條對SEM、CPSEM、AHD、CPAHD等均不發(fā)生交叉反應(yīng)性。 試紙條檢測方法操作簡單,穩(wěn)定性較高,適用于呋喃唑酮代謝物殘留的現(xiàn)場初步篩選,也為其他獸藥殘留試紙條的制備提供借鑒。

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